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gando 2,9 ml de
Solución reguladora de sulfato.
Solución de digestión estándar
- Preparar al mis-
mo tiempo y de la misma manera que la solución de
digestión de la muestra, pero empleando el estándar
de Insulina Humana SR-FA.
Aptitud del sistema
(ver
100 Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución de digestión muestra
y la
Solución de digestión estándar
y registrar las respues-
tas de los picos según se indica en
Procedimiento
: el
cromatograma obtenido a partir de la
Solución de
digestión muestra
debe tener un perfil cromatográfico
similar al cromatograma obtenido con la
Solución de
digestión estándar
. En el cromatograma obtenido a
partir de la
Solución de digestión estándar
identificar
los picos debidos a los fragmentos de digestión I, II y
III. El factor de asimetría de los picos de los frag-
mentos de digestión II y III no debe ser mayor de 1,5;
la resolución
R
entre los mismos no debe ser menor de
3,4. [NOTA: el tiempo de retención para el fragmen-
to I debe ser el mismo para la insulina porcina y para
la insulina humana; el tiempo de retención del frag-
mento II debe ser el mismo para todas las insulinas; el
tiempo de retención del fragmento III debe ser el
mismo para la Insulina Porcina SR-FA].
Bioidentidad
Proceder según se indica en el ensayo de Bioiden-
tidad en
Insulina Bovina e Insulina Porcina -
El
ensayo es válido si el valor de potencia representa no
menos de 70 % de la potencia declarada.
Ensayos de esterilidad
<370>
Cuando la Insulina Humana esté destinada a la
preparación de formas farmacéuticas inyectables sin
posterior tratamiento de esterilización debe cumplir
con los requisitos.
Ensayo de endotoxinas bacterianas
<330>
Cuando la Insulina Humana esté destinada a la
preparación de formas farmacéuticas inyectables sin
posterior tratamiento de eliminación de endotoxinas
bacterianas por un procedimiento apropiado, debe
contener menos de 10 Unidades de Endotoxina por
mg.
Pérdida por secado
<680>
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Insuli-
na Humana y secar entre 100 y 105
°
C durante
24 horas: no debe perder más de 10,0 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición
<270>
No más de 2,5 %, determinado a partir de 200 mg
de Insulina Humana y calculado sobre la sustancia
seca.
Proteínas relacionadas
Sistema cromatográfico, Solución A, Solución B
y
Solución de comparación A
- Proceder según se
indica en
Valoración
.
Fase móvil
y
Aptitud del sistema
- Proceder según
se indica para el ensayo de
Proteínas relacionadas
en
Insulina Bovina e Insulina Porcina
.
Solución estándar A
- Emplear la
Preparación
estándar A
según se indica en
Valoración
.
Solución estándar B
- Emplear la
Preparación
estándar B
según se indica en
Valoración
.
Solución muestra
- Emplear la
Preparación
muestra
según se indica en
Valoración
.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la
Solución muestra
, la
Solución estándar A
,
la
Solución estándar B
y la
Solución de compara-
ción A
, registrar los cromatogramas aproximadamente
durante 50 minutos y medir las respuestas de los pi-
cos. En el cromatograma obtenido a partir de la
Solu-
ción estándar A
, la desamido insulina A-21 aparece
como un pequeño pico después del pico principal y
tiene un tiempo de retención aproximadamente de 1,3
respecto del pico principal. En el cromatograma
obtenido a partir de la
Solución muestra
, la respuesta
del pico correspondiente a la desamido insulina A-21
no debe ser mayor de 2,0 % de la respuesta total de
los picos. A excepción de las respuestas de los picos
de insulina y desamido insulina A-21, la suma de las
respuestas de todos los picos no debe ser mayor de
2,0 % de la respuesta total de los picos. Sólo para
insulina humana semisintética: en el cromatograma
obtenido a partir de la
Solución muestra
, la respuesta
de cualquier pico correspondiente al pico principal en
el cromatograma obtenido a partir de la
Solución
estándar B
no debe ser mayor que la respuesta del
pico correspondiente en el cromatograma obtenido
con la
Solución de comparación A
(1 % de insulina
porcina en la Insulina Humana).
Inmunorreactividad similar a la de proinsulina
(IPI)
No más de 10 ppm, calculado sobre la sustancia
seca y determinado por un método inmunoquímico
sensible y apropiado, como por ejemplo, radioinmu-
noanálisis (ver
635. Métodos inmunoquímicos
). Para
Insulina Humana producida por modificación enzimá-
tica de Insulina Porcina emplear el Reactivo de Refe-
rencia Internacional para Proinsulina Porcina para
calibrar el método. Para Insulina Humana producida
por tecnología ADNr emplear el Reactivo de Referen-
cia Internacional para Proinsulina Humana cuando
corresponda realizar este ensayo.
Impurezas con peso molecular mayor que la
insulina
Proceder según se indica para
Impurezas de peso
molecular mayor que la
Insulina
en
Insulina Bovina e
Insulina Porcina
. La suma de las respuestas de los