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SOLUCIONES Y MEDIOS DE CULTIVO
Soluciones
Cada ensayo debe realizarse con una misma
partida de reactivos, soluciones, medios y ágar.
I. Solución de glucosa al 10 %
D
-glucosa (Dextrosa).................................100 g
Agua destilada c.s.p...................................1 litro
Agregar la
D
-glucosa a 700 ml de agua.
Mezclar hasta que la solución sea límpida.
Completar a volumen con agua destilada.
Fraccionar en volúmenes superiores a 20 ml.
Autoclavar. Conservar en heladera.
II. Solución de biotina al 0,01 %
D
-biotina....................................................10 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Calentar el agua a aproximadamente 40 °C y
disolver la
D
-biotina. Esterilizar por filtración a
través de membrana con tamaño nominal de poro
no mayor de 0,45µm . Conservar en heladera.
III. Solución de histidina al 0,5 %
L
-histidina . HCl . H
2
O............................500 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver la histidina en el agua destilada.
Autoclavar y conservar en heladera.
IV. Solución de histidina/biotina 0,5 mM
D
-biotina..................................................124 mg
L
-histidina . HCl . H
2
O..............................96 mg
Agua destilada............................................1 litro
Calentar el agua a aproximadamente a 40 °C y
disolver la
D
-biotina y la
L
-histidina. Esterilizar
por filtración a través de de membrana con tamaño
nominal de poro no mayor de 0,45 µm. Conservar
en heladera.
V. Solución reguladora de fosfato de sodio 0,2 M
pH 7,4
Solución A
:
Fosfato dibásico de sodio anhidro…………...28,4 g
Agua destilada c.s.p…………………….……1 litro
Solución B:
Fosfato monobásico de sodio monohidrato….27,6 g
Agua destilada c.s.p…………………...……..1 litro
Disolver las sales en un volumen reducido de
agua y luego completar a volumen final.
Para preparar la solución reguladora mezclar
1 volumen de S
olución A
y 2 volúmenes de
S
olución B
. Ajustar el pH a 7,4 ± 0,2. Esterilizar
en autoclave. Conservar en heladera.
VI. Cofactores para la mezcla S9
D
-glucosa-6-fosfato.....................................1,6 g
Nicotinamida adenina dinucleótido
fosfato (NADP)……….…………...............3,5 g
Cloruro de magnesio....................................1,8 g
Cloruro de potasio........................................2,7 g
Fosfato dibásico de sodio anhidro..............12,8 g
Fosfato monobásico de sodio
monohidrato……………………………….2,8 g
Agua destilada c.s.p....................................1 litro
Agregar a 750 ml de agua los ingredientes uno a
uno, disolviendolos por completo antes de agregar
el siguiente. Completar a volumen con agua.
Esterilizar por filtración a través de membrana con
tamaño nominal de poro no mayor de 0,45µm..
Conservar a -20 °C en envases de vidrio inactínico.
VII. Solución de ampicilina al 0,8 %
Ampicilina...............................................800 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver la ampicilina en el agua caliente
(aproximadamente 40 °C). Esterilizar por filtración
a través de membrana con tamaño nominal de poro
no mayor de 0,45µm. Conservar en heladera en
envases de vidrio inactínico durante no más de 15
días.
VIII. Solución de tetraciclina al 0,08 %
Tetraciclina.............................................. .80 mg
Agua destilada:Etanol (1:1)......................100 ml
Disolver la tetraciclina en la mezcla de agua
destilada : etanol (1:1). Esterilizar por filtración a
través de membrana con tamaño nominal de poro
no mayor de 0,45µm. Conservar en envase
inactínico en heladera.
IX. Solución de cristal violeta al 0,1 %
Cristal violeta...........................................100 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver el cristal violeta en el agua. Conservar
en envase inactínico en heladera.
X. Soluciones madres de mutágenos control
Solución de 2-aminoantraceno
: 25 mg por ml en
dimetil sulfóxido.
Solución de Azida sódica
: 10,0 mg por ml en
agua destilada.
Solución de 9-aminoacridina
: 10 mg por ml en
dimetil sulfóxido.
Solución de Nitrofurantoína
: 20 mg por ml en
dimetil sulfóxido.
Solución de Mitomicina C
: 1 mg por ml en agua
destilada.
Solución de 4-Nitroquinolina-N-óxido
: 20 mg