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solución filtrada a un balón equipado con un refri-
gerante y un agitador, agregar 5,0 ml de solución de
hidróxido de sodio, preparada mediante disolución
de 0,4 g de hidróxido de sodio en 5,0 ml de agua y
calentar a reflujo la mezcla durante 25 minutos.
Enfriar el balón y ajustar la solución con ácido
clorhídrico a un pH entre 5,0 y 6,2. Transferir
cuantitativamente la solución a un matraz aforado
de 50 ml, diluir con metanol a volumen, mezclar y
filtrar, descartando los primeros 10 ml del filtrado.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar aproximadamente 15
µ
l de la
Pre-
paración estándar
. Hacer los ajustes necesarios
para obtener tiempos de retención relativos de
aproximadamente 0,63 y 1,0 para
7-O
-glucósido de
apigenina y
7
-metoxicumarina, respectivamente;
registrar las respuestas de los picos según se indica
en
Procedimiento
: la resolución
R
entre
7-O-
glucósido de apigenina y
7
-metoxicumarina no debe
ser menor de 3,5; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
15
µ
l) de la
Preparación
estándar
y la
Preparación
muestra
. Dejar eluir la
Preparación muestra
por lo
menos seis veces el tiempo de retención de
7-O
-
glucósido de apigenina. Registrar los cromatogra-
mas y medir las respuestas de todos los picos ob-
servados en el cromatograma de la
Preparación
muestra
. Los tiempos de retención relativos deben
ser aproximadamente 0,30; 0,47; 0,66; 0,89 y 1,0
para
7-O-
glucósido
de
apigenina,
7
-
metoxicumarina, apigenina,
trans
-espiroéter y
cis
-
espiroéter, respectivamente. Calcular el porcentaje
de 7-glucósido de apigenina en la porción de Man-
zanilla en ensayo, por la fórmula siguiente:
12(
C
/
P
)( /
en la cual
C
es la concentración en mg por ml de
7-
O-
glucósido de apigenina en la
Preparación están-
dar
;
P
es el peso en g de Manzanilla en ensayo para
la
Preparación muestra
,
y
)
y
son las respuestas de
los picos de
7-O-
glucósido de apigenina obtenidos a
partir de la
Preparación muestra
y la
Preparación
estándar
, respectivamente.