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VALORACIÓN
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 272 nm y una columna de
25 cm
×
4,6 mm, con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10
µ
m de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por
minuto.
Fase móvil
- Agua y metanol (75:25). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Preparación estándar
- Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de
Cafeína
y 15 mg de
teobromina, transferir a un matraz de 100 ml,
agregar cantidad suficiente de
Fase móvil
y agitar
hasta disolver. Completar a volumen con
Fase
móvil
y mezclar. Transferir 10 ml de esta solución
a un matraz aforado de 100 ml y completar a
volumen con el mismo solvente.
Preparación muestra
- Pesar exactamente
alrededor de 1,0 g de Nuez de Cola previamente
reducida a polvo fino, transferir a un recipiente
adecuado y agregar 50 ml de metanol. Calentar a
reflujo en baño de agua durante 30 minutos, enfriar
a temperatura ambiente y filtrar. Lavar el filtro con
10 ml de metanol y retomar el residuo con 50 ml de
metanol y repetir la operación anterior. Reunir los
filtrados y las soluciones de lavado en un matraz
aforado de 200 ml y completar a volumen con
metanol. Transferir 20 ml de esta solución a un
balón y evaporar hasta sequedad a presión reducida.
Disolver el residuo con
Fase móvil
, transferir a un
matraz aforado de 50 ml y completar a volumen con
Fase móvil
.
Aptitud del sistema
- Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar las respuestas de
los picos según se indica en
Procedimiento
: la
resolución
R
entre los picos de cafeína y teobromina
debe ser mayor de 2,5. Si fuera necesario, ajustar el
volumen de agua en la proporción de
Fase móvil
.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales de
Preparación
estándar
y de
Preparación muestra
. Registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
correspondientes a cafeína. Calcular el porcentaje
de cafeína en la porción de Nuez de Cola, por la
fórmula siguiente:
50(
P
E
/
P
M
)(
r
M
/
r
E
)
en la cual
r
M
y
r
E
son
las respuestas de los picos
correspondientes a cafeína en el cromatograma
obtenido con la
Preparación muestra
y la
Preparación estándar,
respectivamente,
P
M
es el
peso en g de Nuez de Cola en la
Preparación
muestra
y
P
E
es el peso en g de
Cafeína
en la
Preparación estándar
.