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15 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10
m de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 0,8 ml por minu-
to.
Fase móvil
- Agua y acetonitrilo (9:1). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Solución de resolución
- Pesar exactamente al-
rededor de 10 mg de Tiotepa SR-FA, transferir a un
recipiente con tapa de 4,0 ml, agregar 2,0 ml de
metanol y mezclar. Agregar 50 µl de solución de
ácido fosfórico al 0,1 %, tapar y calentar a 65 °C
durante 50 segundos. Enfriar, agregar 1,0 ml de
metanol y mezclar.
Preparación estándar
- Disolver una porción
exactamente pesada de Tiotepa SR-FA en
Fase
móvil
para obtener una solución de aproximada-
mente 1,5 mg por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 75 mg de Tiotepa y transferir a un matraz
aforado de 50 ml. Disolver y completar a volumen
con
Fase móvil
y mezclar.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía)
-
Cromatografiar la
Solución de resolución
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 1,25 para metoxitiotepa y
1,0 para tiotepa; la resolución
R
entre los picos de
metoxitiotepa y tiotepa no debe ser menor de 3,0.
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: la eficiencia de la columna no debe ser
menor de 2.600 platos teóricos; el factor de asimetr-
ía no debe ser mayor de 1,8; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10
l) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C
6
H
12
N
3
PS en la porción de Tiotepa en
ensayo.