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Procedimiento
: los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,6 para guanina y 1,0
para tioguanina; la resolución
R
entre los picos de
guanina y tioguanina no debe ser menor de 3,0; el
factor de asimetría no debe ser mayor de 2,0; y la
desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas para el pico de guanina no debe ser mayor
de 5,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la
Solución estándar
y la
Solución
muestra
. Registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de guanina en la porción de Tioguanina
en ensayo. No debe contener mas de 2,5 %.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 248 nm y una columna de
5 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por
minuto.
Fase móvil
-
Fosfato monobásico de
sodio 0,05 M. Ajustar a pH 3,0 con ácido fosfórico.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver
Aptitud del sistema
en
100
.
Cromatografía
).
Solución de ácido fosfórico
- Transferir
cuidadosamente 1 ml de ácido fosfórico a un
recipiente conteniendo 99 ml de agua y mezclar.
Preparación estándar -
Disolver una cantidad
exactamente pesada de Tioguanina SR-FA con
hidróxido de sodio 0,01 N cuantitativamente y en
etapas, si fuera necesario, para obtener una solución
de aproximadamente 0,4 mg por ml. Transferir
10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml y completar a volumen con
Solución de
ácido fosfórico
para obtener una solución de
aproximadamente 0,04 mg de Tioguanina por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente
alrededor de 40 mg de Tioguanina y transferir a un
matraz aforado de 100 ml. Disolver en hidróxido
de sodio 0,01 N, completar a volumen con
hidróxido de sodio 0,01 N y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con
Solución de ácido
fosfórico
y mezclar.
Aptitud del sistema
(ver
100
.
Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento
: los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,6 para guanina y 1,0
para tioguanina; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento -
Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
. Registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C
5
H
5
N
5
S en la porción de Tioguanina
en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Tioguanina es anhidra o
hemihidrato.