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sas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal debe
ser aproximadamente 1,5 ml por minuto.
Solución reguladora de fosfato
- Disolver
136,1 g de fosfato monobásico de potasio en
aproximadamente 500 ml de agua, agregar 6,3 ml
de ácido fosfórico, diluir con agua a 1 litro y mez-
clar.
Fase móvil
- Agua, acetonitrilo,
Solución regu-
ladora de fosfato
, ácido cítrico 1,0 M y perclorato
de sodio 0,5 M (51:35:10:2:2). Filtrar y desgasifi-
car. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del
sistema
en
100. Cromatografía
).
Diluyente
- Agua, acetonitrilo, fosfato dibásico
de potasio 1,0 M, fosfato monobásico de potasio
1,0 M y ácido cítrico 1,0 M (640:250:77:23:10).
Preparación estándar
- Pesar exactamente al-
rededor de 40 mg de Rifampicina SR-FA, transferir
a un matraz aforado de 200 ml, disolver y completar
a volumen con acetonitrilo y mezclar. Sonicar
durante aproximadamente 30 segundos, si fuera
necesario, para disolver. [NOTA: emplear esta
solución dentro de las 5 horas de su preparación].
Transferir 10,0 ml de esta solución a un matraz
aforado de 100 ml, completar a volumen con
Dilu-
yente
y mezclar. [NOTA: preparar esta dilución
final inmediatamente antes de su inyección en el
cromatógrafo].
Preparación muestra
- Emplear Rifampicina,
proceder según se indica para
Preparación están-
dar
.
Solución de resolución
- Disolver cantidades
apropiadas de Rifampicina SR-FA y Quinona de
Rifampicina SR-FA en acetonitrilo para obtener una
solución de aproximadamente 0,1 mg de cada una
por ml. Transferir 1,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 10 ml, completar a volumen con
Diluyente
y mezclar.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución de resolución
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: la resolución
R
entre los picos de qui-
nona de rifampicina y rifampicina no debe ser me-
nor de 4,0; los tiempos de retención relativos deben
ser aproximadamente 0,6 para quinona de rifampi-
cina y 1,0 para rifampicina. Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar las respuestas de
los picos según se indica en
Procedimiento
: la efi-
ciencia de la columna determinada a partir del pico
de rifampicina no debe ser menor de 1.000 platos
teóricos; la desviación estándar relativa para inyec-
ciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
50 µl) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en mg de C
43
H
58
N
4
O
12
en la porción de
Rifampicina en ensayo.