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pH 6,0 con ácido cítrico 0,1 M o fosfato dibásico de
sodio 0,2 M.
Fase móvil
-
Solución reguladora de pH 6,0
y
acetonitrilo (90:10). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Preparación estándar
- Disolver una cantidad
exactamente pesada de Metotrexato SR-FA en
Fase
móvil
para obtener una solución de aproximada-
mente 100 µg por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 25 mg de Metotrexato, transferir a un
matraz aforado de 250 ml, disolver en
Fase móvil
,
completar a volumen con el mismo solvente y mez-
clar.
Solución de aptitud del sistema
- Disolver can-
tidades apropiadas de Metotrexato SR-FA y
Ácido
Fólico
en
Fase móvil
para obtener una solución de
aproximadamente 0,1 mg por ml de cada una.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución de aptitud del sistema
y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en
Procedimiento
: los tiempos de retención relati-
vos deben ser aproximadamente 0,35 para ácido
fólico y 1,0 para metotrexato; la resolución
R
entre
los picos de ácido fólico y metotrexato no debe ser
menor de 8,0; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,5 %.
Procedimiento -
Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la
Preparación muestra
y la
Preparación
estándar
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C
20
H
22
N
8
O
5
en la porción de Meto-
trexato en ensayo.