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25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por gel de sílice de 10 µm de diámetro químicamen-
te unido a un revestimiento de intercambio catióni-
co fuertemente ácido. El caudal debe ser aproxi-
madamente 1,5 ml por minuto.
Fase móvil
- Agua y acetonitrilo (60:40) que
contenga 0,5 ml de ácido fosfórico por cada
1.000 ml. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Croma-
tografía
).
Preparación estándar
- Transferir cantidades
exactamente pesadas de Levotiroxina SR-FA y
Liotironina SR-FA a un envase apropiado, disolver
en
Fase móvil
y diluir cuantitativamente y en etapas
con
Fase móvil
para obtener una solución de
aproximadamente 10 µg de levotiroxina por ml y
0,2 µg de liotironina por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 100 µg de Levotiroxina Sódica y transferir
a un tubo de centrífuga. Agregar 2 perlas de vidrio
y 10 ml de
Fase móvil
y mezclar empleando un
mezclador por vórtice durante 3 minutos. Centrifu-
gar hasta obtener un líquido sobrenadante transpa-
rente, filtrando si fuera necesario.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: la resolución
R
entre los picos de lioti-
ronina y levotiroxina no debe ser menor de 5,0; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
100 µl) de la
Preparación estándar
y la
Prepara-
ción muestra
, registrar los cromatogramas y medir
las respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C
15
H
10
I
4
NNaO
4
en la porción de Levo-
tiroxina Sódica en ensayo, a partir de las respuestas
de los picos de levotiroxina obtenidos con la
Prepa-
ración muestra
y la
Preparación estándar
.