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Fase móvil
- Tolueno, acetona y ácido acético
glacial (60:30:15).
Solución de estándar
- Disolver 10 mg de nitra-
to de potasio en 1 ml de agua y diluir a 100 ml con
alcohol.
Solución muestra
- Agitar una cantidad de Dini-
trato de Isosorbida Diluido que corresponda a
100 mg de dinitrato de isosorbida con 5 ml de alco-
hol y filtrar.
Revelador -
Disolver 750 mg de ioduro de pota-
sio en 100 ml de agua, calentar a ebullición y agre-
gar, mientras se agita, una solución de 500 mg de
almidón soluble en 35 ml de agua. Calentar a ebu-
llición durante 2 minutos y dejar enfriar.
Procedimiento
- Aplicar por separado sobre la
placa 10 µl de
Solución de referencia
y 10 µl de
Solución muestra
. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
cuartas partes de la longitud de la placa. Secar la
placa bajo corriente de aire hasta evaporación com-
pleta del ácido acético. Pulverizar sobre la placa
con
Revelador
recientemente preparado. Exponer
la placa a la luz ultravioleta de 254 nm durante
15 minutos y examinar con luz diurna. Ninguna
mancha correspondiente al ion nitrato en el croma-
tograma obtenido a partir de la
Solución muestra
debe ser más intensa que la mancha obtenida con la
Solución de referencia
(0,5 %, calculado como
nitrato de potasio).
5-Nitrato de isosorbida y 2-Nitrato de isosor-
bida
Preparación muestra A
,
Preparación estándar
C, Preparación estándar D
;
Preparación estándar
E
y
Fase móvil -
Proceder según se indica en
Valo-
ración.
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado entre 210 y 215 nm y una
columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria
constituida por aminopropilmetilsilano química-
mente unida a partículas de sílice de 10 µm de diá-
metro. El caudal debe ser aproximadamente 1 ml
por minuto.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar C
y regis-
trar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento
: ajustar la sensibilidad del equipo de
manera que el pico principal del cromatograma
obtenido a partir de la
Preparación estándar C
no
sea menor al 20 % de la escala completa del regis-
trador. Cromatografiar la
Preparación estándar E
y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en
Procedimiento:
los tiempos de retención deben
ser aproximadamente 5 minutos para dinitrato de
isosorbida, 8 minutos para 2-nitrato de isosorbida y
11 minutos para 5-nitrato de isosorbida. El ensayo
solo es válido si en el cromatograma obtenido a
partir de la
Preparación estándar E,
la resolución
R
entre los picos correspondientes al dinitrato de
isosorbida y al 2-nitrato de isosorbida es mayor
a 6,0.
Procedimiento -
Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10
l) de
Preparación muestra A
,
Preparación
estándar C
y
Preparación estándar D
. En el cro-
matograma obtenido a partir de la
Preparación
muestra A
, la respuesta del pico correspondiente al
2-nitrato de isosorbida no debe ser mayor a la del
pico principal obtenido en el cromatograma de la
Preparación estándar C
(0,5 %), y la respuesta del
pico correspondiente al 5-nitrato de isosorbida no
debe ser mayor a la del pico principal del cromato-
grama obtenido a partir de la
Preparación estándar
D
(0,5 %).
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por aminopropilmetilsilano químicamente unida a
partículas de sílice de 10 µm de diámetro. El cau-
dal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
Fase móvil
- 2,2,4-Trimetilpentano y alcohol
(85:15). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Croma-
tografía
).
Preparación estándar A
- Transferir 25,0 mg de
Dinitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz aforado
de 25 ml, suspender en 20 ml de
Fase móvil,
soni-
car durante 15 minutos, y completar a volumen con
Fase móvil
. Filtrar la suspensión a través de un
filtro de membrana.
Preparación estándar B -
Transferir 1,0 ml de
la
Preparación estándar A
a un matraz aforado de
10 ml y completar a volumen con
Fase móvil
.
Preparación estándar C
- Disolver 10,0 mg de
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en
Fase móvil
y
diluir a 10,0 ml con
Fase móvil
. Transferir 0,1 ml
de esta solución a un matraz aforado de 20 ml y
completar a volumen con
Fase móvil
.
Preparación estándar D
- Disolver 10,0 mg de
Mononitrato de Isosorbida SR-FA en
Fase móvil
y
diluir hasta 10,0 ml con
Fase móvil
. Transferir
0,1 ml de esta solución a un matraz aforado de
20 ml y completar a volumen con
Fase móvil
.
Preparación estándar E
- Disolver 5 mg de
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en
Fase móvil
y
diluir hasta 10 ml con
Fase móvil
. A 1 ml de esta