Versión de HTML Básico
FLUORESCEÍNA
O
O
O
OH
HO
C
20
H
12
O
5
PM: 332,3
2321-07-5
Definición
-
Fluoresceína
es
3´,6´-Dihidroxispiro[isobenzofuran-1(3
H
),9´-[9
H
]
xanten]-3-ona. Debe contener no menos de 97,0
por ciento y no más de 102,0 por ciento de
C
20
H
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, calculado sobre la sustancia anhidra y
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales
- Polvo rojo amarillento
a rojo. Soluble en hidróxidos alcalinos diluidos;
insoluble en agua.
Sustancias de referencia
- Diacetilfluoresceí-
na SR-FA. Fluoresceína SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Absorción infrarroja <460>.
En fase sólida.
Secar previamente sobre gel de sílice durante
16 horas.
Determinación de agua
<120>
Titulación volumétrica directa.
No más de
1,0 %.
Determinación de cinc
Suspender 100 mg de Fluoresceína en 10 ml de
una solución saturada de cloruro de sodio, agregar
2 ml de ácido clorhídrico 3 N, mezclar, filtrar y
agregar 1 ml de ferricianuro de potasio (SR) al
filtrado: no se debe producir turbidez.
Acriflavina
Suspender 10 mg de Fluoresceína en 5 ml de
agua, mezclar y filtrar. Agregar al filtrado unas
pocas gotas de una solución de salicilato de so-
dio 1 en 10: no se debe formar precipitado.
VALORACIÓN
Diluyente
- Solución reguladora alcalina de bo-
rato pH 9,0 (ver
Soluciones reguladoras
en
Reacti-
vos y Soluciones
).
Preparación estándar
- Pesar exactamente al-
rededor de 110 mg de Diacetilfluoresceína SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver
con 10 ml de alcohol, agregar 2 ml de hidróxido de
sodio 2,5 N y calentar en un baño de vapor hasta
ebullición durante 20 minutos agitando con fre-
cuencia. Enfriar, completar a volumen con agua y
mezclar. Diluir cuantitativamente y en etapas con
agua para obtener una solución de aproximadamen-
te 1,1 µg de diacetilfluoresceína por ml. Transferir
3,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, agregar 20 ml de
Diluyente
, completar a
volumen con agua y mezclar.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 90 mg de Fluoresceína, transferir a un
matraz aforado de 100 ml y disolver con 10 ml de
alcohol. Agregar 2 ml de hidróxido de sodio 2,5 N
y calentar en un baño de vapor hasta ebullición
durante 20 minutos agitando con frecuencia. En-
friar, completar a volumen con agua y mezclar.
Diluir cuantitativamente y en etapas con agua para
obtener una solución de aproximadamente 0,9 µg
por ml. Transferir 3,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 100 ml, agregar 20 ml de
Dilu-
yente
, completar a volumen con agua y mezclar.
Procedimiento
- Determinar las intensidades de
fluorescencia, con un fluorómetro, de la
Prepara-
ción estándar
y la
Preparación muestra
, a la longi-
tud de onda de excitación y de emisión, 485 y
515 nm, respectivamente. Calcular la cantidad en
mg de C
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en la porción de Fluoresceína en
ensayo, por la fórmula siguiente:
(332,3/416,4)(3.333
C)
(
I
M
/
I
E
)
en la cual 332,3 y 416,4 son los pesos moleculares
de Fluoresceína y Diacetilfluoresceína respectiva-
mente,
C
es la concentración en µg por ml de Dia-
cetilfluoresceína SR-FA en la
Preparación están-
dar
, y
I
M
e
I
E
son los valores de fluorescencia obte-
nidos a partir de la
Preparación muestra
y la
Pre-
paración estándar
, respectivamente.