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5 ml de la
Solución del estándar interno
a un ma-
traz aforado de 200 ml. Agregar 100 ml de meta-
nol, completar a volumen con agua y mezclar para
obtener una solución de aproximadamente 20 µg de
Estradiol SR-FA por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Estradiol, transferir a un matraz
aforado de 250 ml, completar a volumen con meta-
nol y mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solución a
un matraz aforado de 200 ml, agregar 5,0 ml de
Solución del estándar interno
y 100 ml de metanol,
completar a volumen con agua y mezclar.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: la resolución
R
entre los picos de estra-
diol y la estrona no debe ser menor de 2,0; la des-
viación estándar relativa para inyecciones repetidas
no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
25 µl) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Los tiempos de
retención relativos deben ser aproximadamente
0,7 para el estándar interno, 1,3 para la estrona y
1,0 para el estradiol. Calcular la cantidad de
C
18
H
24
O
2
en la porción de Estradiol en ensayo,
relacionando las respuestas de los picos del estra-
diol y las del estándar interno.