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de 100 ml, completar a volumen con agua y mez-
clar.
Solución estándar
- Preparar una solución
1 en 50 de alcohol en agua. Determinar la densidad
relativa a 25 °C (ver
160. Determinación de la
densidad relativa
) y obtener el porcentaje de
C
2
H
5
OH por referencia a la
Tabla alcoholimétrica
en
Tablas
.
Preparación estándar
- Transferir 4,0 ml de
So-
lución estándar
y 5,0 ml de
Solución del estándar
interno
a un matraz aforado de 10 ml. Completar a
volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta
solución en el cromatógrafo de gases.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 500 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-
sona, transferir a un matraz aforado de 10 ml, agre-
gar 5,0 ml de
Solución estándar interno
y mezclar
hasta disolver. Completar a volumen con agua y
mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el cro-
matógrafo de gases.
Cálculos
- Calcular el porcentaje de alcohol en
la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en
ensayo por la fórmula siguiente:
4(
S
/
P
)(
R
M
/R
E
)
en la cual
S
es el porcentaje de alcohol en la
Solu-
ción estándar
,
P
es el peso en g de Fosfato Sódico
de Dexametasona empleado en la
Preparación
muestra
y
R
M
y
R
E
son las respuestas del pico de
alcohol, relativas al estándar interno, en la
Prepara-
ción muestra
y la
Preparación estándar
, respecti-
vamente. El contenido de C
2
H
5
OH no debe ser
mayor de 8,0 %.
Fosfato inorgánico
Solución estándar de fosfato
-
Disolver
143,3 mg de fosfato monobásico de potasio seco en
agua y diluir a 1 litro. Esta solución contiene el
equivalente a 0,10 mg de fosfato en cada ml.
Reactivo para fosfato A
- Disolver 5 g de mo-
libdato de amonio en ácido sulfúrico 1 N para obte-
ner 100 ml.
Reactivo para fosfato B -
Disolver 350 mg de
sulfato
p
-metilaminofenol en 50 ml de agua, agre-
gar 20 g de bisulfito de sodio, mezclar hasta disol-
ver y diluir con agua a 100 ml.
Solución muestra
- Pesar exactamente alrededor
de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona,
transferir a un matraz aforado de 25 ml y disolver
en una mezcla de 10 ml de agua y 5 ml de ácido
sulfúrico 2 N, calentando si fuera necesario. Agre-
gar 1 ml de
Reactivo para fosfato A
y 1 ml de
Reac-
tivo para fosfato B
, completar a volumen con agua,
mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente
durante 30 minutos.
Solución estándar
- En forma similar y en suce-
sión inmediata, preparar una
Solución estándar
empleando 5,0 ml de
Solución estándar de fosfato
en lugar de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-
sona.
Procedimiento
- Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de ambas soluciones, en celdas
de 1 cm a 730 nm, con un espectrofotómetro, em-
pleando agua como blanco. La absorbancia de la
Solución muestra
no debe ser mayor que la de la
Solución estándar
. No debe contener más de 1,0 %
de fosfato.
Dexametasona libre
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm × 4,5 mm con fase estacionaria constituida
por grupos fenilo químicamente unidos a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,2 ml por minuto.
Solución de trietilamina
- Preparar una solución
que contenga 7,5 ml de trietilamina en 1 litro de
agua. Ajustar a pH 5,4 con ácido fosfórico.
Fase móvil
-
Solución de trietilamina
y metanol
(74:26). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Croma-
tografía
).
Solución estándar
- Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de Fosfato de Dexametaso-
na SR-FA en
Fase móvil
para obtener una solución
de aproximadamente 0,5 mg por ml. Preparar una
segunda solución disolviendo una cantidad exacta-
mente pesada de Dexametasona SR-FA en una
mezcla de metanol y agua (1:1) para obtener una
solución de aproximadamente 50 µg por ml. Trans-
ferir 10,0 ml de la primera solución y 1,0 ml de la
segunda solución a un matraz aforado de 100 ml.
Completar a volumen con
Fase móvil
y mezclar.
Solución muestra
- Pesar exactamente alrededor
de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona,
transferir a un matraz aforado de 100 ml y disolver
con
Fase móvil
. Completar a volumen con
Fase
móvil
y mezclar. Diluir 5,0 ml de esta solución con
Fase móvil
a 50,0 ml.
Solución de aptitud del sistema
- Preparar una
solución en
Fase móvil
de aproximadamente 0,05 y
0,02 mg por ml de Fosfato de Dexametasona
SR-FA y de Dexametasona SR-FA, respectivamen-
te.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución de aptitud del sistema
y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en
Procedimiento
: la eficiencia de la columna de-
terminada para el pico principal no debe ser menor
de 900 platos teóricos; el factor de asimetría para el