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Fase móvil
- Diluir 45 ml de fosfato monobásico
de potasio 0,5 M con agua a 450 ml. Agregar
aproximadamente 530 ml de metanol, enfriar a tempe-
ratura ambiente y completar a 1 litro con metanol.
Ajustar con ácido fosfórico 0,5 M a pH 5,50 0,05 y
filtrar a través de una membrana filtrante de 0,45 µm.
Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Preparación estándar
- Disolver una cantidad
exactamente pesada de Colchicina SR-FA en una
mezcla de metanol y agua (1:1) y diluir, cuantitativa-
mente y en etapas, con la misma mezcla para obtener
una solución de aproximadamente 6 µg de Colchici-
na SR-FA por ml. Esta solución es estable durante
4 meses cuando se almacena en envases de cierre
perfecto y en la oscuridad.
Preparación muestra
- [NOTA: preparar en el
momento de su uso]. Pesar exactamente alrededor de
60 mg de Colchicina y transferir a un matraz aforado
de 500 ml. Disolver en una mezcla de metanol y agua
(1:1) y completar a volumen con la misma mezcla.
Transferir 5,0 ml de esta solución a un matraz aforado
de 100 ml y completar a volumen con la misma mez-
cla.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Proce-
dimiento
: la eficiencia de la columna no debe ser
menor de 4.500 platos teóricos; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor
de 2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de todos los picos registrados durante
1,5 veces el tiempo de retención de colchicina. El
tiempo de retención para el pico de colchicina debe
estar comprendido entre 5,5 y 9,5 minutos. Calcular
la cantidad de C
22
H
25
NO
6
en la porción de Colchicina
en ensayo.