Versión de HTML Básico
BLEOMICINA,
SULFATO DE
H
H
H
H
N N
N
NH
2
HN
N
N
NH N
S
N
N
NH
2
O
H
NH
2
H
2
N
CH
3
H
CH
3
HO
CH
3
O
S N
H
R
O
H
O
HO CH
3
O
O
O
O
O
OH
HO
O
OH
O
OH
OH
OH
O
O NH
2
A
2
: R= NH(CH
2
)
3
S
+
(CH
2
)
B
2
: R= NH(CH
2
)
3
NH C NH
2
NH
. x H 2 SO 4
9041-93-4
Definición
- Sulfato de Bleomicina es el Sulfa-
to de una mezcla de glicopéptidos citotóxicos bási-
cos producidos mediante el crecimiento de
Strepto-
mices verticillus
o producidos por otros medios.
Debe tener una potencia de no menos de 1,5 y no
más de 2,0 Unidades de Bleomicina por mg y debe
cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales
- Polvo amorfo blanco o
blanco amarillento. Muy higroscópico. Muy solu-
ble en agua; poco soluble en etanol; prácticamente
insoluble en acetona y éter.
Sustancia de referencia
- Sulfato de Bleomici-
na SR-FA.
CONSERVACIÓN
Envases de cierre perfecto. Si la sustancia es
estéril, conservar entre 2 y 8 ºC.
ENSAYOS
Identificación
A
- Absorción infrarroja <460>.
En fase sóli-
da
.
B
- Debe responder a los ensayos para
Sulfa-
to
<410>.
Determinación del pH
<250>
Entre 4,5 y 6,0, determinado sobre una solución
de aproximadamente 10 Unidades de Bleomicina
por ml.
Contenido de cobre
Ácido nítrico diluido
- Diluir 20 ml de ácido
nítrico a 2 litros con agua.
Solución madre de cobre
- Transferir 1,0 g de
cobre a un matraz aforado de 1 litro, disolver en
20 ml de ácido nítrico, completar a volumen con
Ácido nítrico diluido
y mezclar. Conservar en un
recipiente de polietileno. Esta solución contiene
1,0 mg de cobre por ml.
Soluciones estándar
- Transferir 5,0 ml de
So-
lución madre de cobre
a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con
Ácido nítrico
diluido
y mezclar. Transferir 3,0; 9,0 y 15,0 ml,
respectivamente, de esta solución a tres matraces
aforados de 100 ml, completar a volumen el conte-
nido de cada matraz con
Ácido nítrico diluido
y
mezclar. Estas
Soluciones estándar
contienen 1,5;
4,5 y 7,5 µg de cobre por ml, respectivamente.
Solución muestra
- Pesar exactamente alrededor
de 75 mg de Sulfato de Bleomicina y disolver en
10,0 ml de
Ácido nítrico diluido
.
Procedimiento
- Determinar las absorbancias de las
Soluciones estándar
y la
Solución muestra
en la
línea de emisión del cobre a 324,8 nm, con un es-
pectrofotómetro de absorción atómica (ver
440. Espectrofotometría de absorción y emisión
atómica
), equipado con una lámpara de cobre de
cátodo hueco y una llama de aire-acetileno, emple-
ando
Ácido nítrico diluido
como blanco. . Graficar
las absorbancias de las
Soluciones estándar
en
función de la concentración en µg por ml de cobre y
trazar la línea recta que mejor se ajuste a los puntos
trazados. A partir del gráfico obtenido, determinar
la concentración
C
en µg de cobre por ml en la
Solución muestra
. Calcular el porcentaje de cobre
en la porción de Sulfato de Bleomicina en ensayo.
No debe contener más de 0,1 %.
Contenido de bleomicinas
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
to.
Fase móvil
-
Disolver 960 mg de
1-pentanosulfonato de sodio en 1 litro de ácido
acético 0,08 N desaireado, agregar 1,86 g de edetato
disódico y ajustar a pH 4,3 con hidróxido de amo-
nio. Filtrar y desgasificar. Emplear un gradiente
lineal de 10 a 40 % de metanol mezclado con esta
solución con un tiempo de mezclado de gradiente
de 60 minutos y dejar que la cromatografía proceda
con la mezcla final durante 20 minutos adicionales
o hasta que eluya la desmetilbleomicina A
2
.
Solución muestra
- Disolver Sulfato de Bleomi-
cina en agua desgasificada para obtener una solu-
ción de aproximadamente 2,5 Unidades de Bleomi-
cina por ml. [NOTA: conservar esta solución en un
refrigerador hasta el momento de su uso].