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extracción
para que toda la muestra quede
embebida. Agitar 1 hora en un agitador mecánico o
5 minutos en licuadora a alta velocidad. Filtrar y
recolectar el filtrado en un erlenmeyer de 250 ml.
Transferir 16 ml del extracto a un erlenmeyer de
125 ml, agregar 32 ml de
Solución reguladora de
fosfato pH 7,4
. Agitar y filtrar a través de una
membrana filtrante de porosidad de 0,8 a 1,6 µm.
Aplicar 24 ml del filtrado a través de la
Columna
cromatográfica
asegurando un caudal de 1 ó 2 gotas
por segundo y cuidando que la columna no se
seque. Lavar la columna con 20 ml de agua y secar
haciendo pasar aire a través de la misma con una
jeringa vacía. Descartar el líquido de lavado. Eluir
las aflatoxinas adsorbidas en la columna lentamente
por acción de la gravedad con 2 ml de metanol.
Recolectar todo el eluido en un envase de 5 ml de
vidrio inactínico. Llevar a sequedad en estufa de
vacío a 55 °C. Disolver el extracto con 200 µl de
acetonitrilo, agitar vigorosamente y agregar 700 µl
de
Solución de derivatización
. Cerrar el envase y
mezclar. Calentar a 65 °C durante no menos de
8,5 minutos [NOTA: este tiempo es necesario para
una completa derivatización de aflatoxina B
1
(B
2
a)
y G
1
(G
2
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo 50 µl de cada
Solucion estándar
diluida
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Graficar las
respuestas de los picos en función de la
concentración de aflatoxinas, en µg por ml, para
cada aflatoxina. Trazar la recta que mejor se ajuste
a los puntos marcados. Inyectar en el cromatógrafo
50 µl de la
Solución muestra
, registrar el
cromatograma y medir la respuesta de los picos.
B
a)]. Dejar enfriar a temperatura ambiente
antes de abrir el envase.
2
a, G
2
y B
2
son aproximadamente 6, 8 ,9 y
11 minutos, respectivamente.
Calcular la
concentración de las aflatoxinas presentes en la
Solución muestra
empleando el gráfico de respuesta
en función de la concentración, obtenido a partir de
las
Soluciones estándar diluidas
.