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aeruginosa
puede ser confirmada por otros ensayos
bioquímicos apropiados.
Ensayo para Salmonella spp.
y Escherichia coli
A un volumen de la dilución preparada en
Recuento de aerobios viables
, equivalente a 1 g o
1 ml de producto, agregar Caldo Lactosado para
obtener 100 ml, mezclar e incubar. Observar el
medio. Si se detecta desarrollo bacteriano mezclar
suavemente y transferir porciones de 1 ml a tubos
que contengan respectivamente, 10 ml de Caldo
Selenito-Cistina y 10 ml Caldo Tetrationato,
mezclar e incubar durante un período de 12 a
24 horas (conservar el Caldo Lactosado remanente).
Ensayo para Salmonella spp
. - Mediante el
empleo de un ansa de inoculación, transferir
porciones de los medios de selenito-cistina y de
tetrationato, a las superficies de Agar Verde
Brillante, Agar Xilosa-Lisina- Desoxicolato y Agar
Sulfito de Bismuto. Tapar, invertir las placas e
incubar. La muestra cumple con los requisitos del
ensayo para ausencia de
Salmonella spp
por gramo
o mililitro si no se observa el desarrollo de colonias
con las características descriptas en la
Tabla 4.
Si al menos en uno de los medios se encuentran
colonias de bacilos Gram negativos que coincidan
con las descriptas en la
Tabla 4
, realizar un ensayo
adicional, transfiriendo individualmente cada una
de las colonias sospechosas, mediante un ansa de
inoculación a un tubo que contenga Agar Triple
Azúcar-Hierro solidificado con una superficie
inclinada y un fondo, inoculándose la superficie
primero y luego el fondo por punción. Incubar los
tubos. Si no se observara reacción alcalina (color
rojo) sobre la superficie y ácida (color amarillo) en
el fondo (con o sin ennegrecimiento concomitante
del fondo, producido por la formación de ácido
sulfhídrico), la muestra cumple con los requisitos
del ensayo para ausencia del género
Salmonella
. La
presencia o ausencia de
Salmonella
puede ser
confirmada por ensayos bioquímicos apropiados.
Ensayo para escherichia coli
- Con la ayuda de
un ansa de inoculación, transferir una porción del
Caldo Lactosado remanente sobre la superficie de
Agar Mac Conkey. Tapar, invertir e incubar las
placas.
Si se observaran colonias como las descriptas en
la
Tabla 5
, realizar un ensayo adicional
transfiriendo
individualmente
las
colonias
sospechosas, con la ayuda de un ansa de
inoculación, a la superficie de Agar Levine Eosina-
Azul de Metileno. Tapar, invertir e incubar las
placas. La muestra cumple con los requisitos del
ensayo para la ausencia de
Escherichia coli
por
gramo o mililitro si, ninguna de las colonias
observadas
presenta
un
brillo
metálico
característico frente a la luz reflejada y un aspecto
negro azulado frente a la luz transmitida. La
presencia de
Escherichia coli
puede ser confirmada
por ensayos bioquímicos apropiados.
Ensayo para anaerobios
Sulfito-reductores
A un volumen de la dilución preparada en
Recuento de aerobios viables
, equivalente a 1 g o
1 ml de producto, agregar Medio Tioglicolato
previamente calentado durante 10 minutos en un
baño de vapor y enfriado, adicionado de azida
sódica al 0,03 %, hasta obtener 100 ml. Cubrir la
superficie con una mezcla estéril de vaselina y
parafina. [NOTA: la mezcla estéril de vaselina y
parafina se prepara fundiendo 250 g de parafina
conjuntamente con 750 g de vaselina, mezclando
bien, repartiendo en tubos y esterilizando en
autoclave]. El medio inoculado y cubierto con la
capa de vaselina-parafina se incuba entre 48 y
72 horas a 35 °C.
Si se observa desarrollo
microbiano, transferir 1 ml a un tubo estéril de no
más de 16 mm de diámetro exterior y no menos de
200 mm de largo. Agregar por las paredes, Agar
Sulfito-Polimixina- Sulfadiacina, previamente
fundido y enfriado a 40 °C, hasta no más de 1 cm
del borde superior del tubo. Cubrir con la mezcla
de vaselina-parafina e incubar entre 5 y 7 días a
35 °C, observando diariamente. La muestra cumple
con el ensayo de ausencia de microorganismos
anaerobios sulfito-reductores por gramo o mililitro
si no se observa el desarrollo de colonias negras.
Gérmenes revivificables
A un volumen de la dilución preparada en
Recuento de aerobios viables
, equivalente a 1 g o
1 ml de producto, agregar Caldo Digerido de
Caseína-Soja para obtener 100 ml. Incubar durante
5 días entre 25 y 28 °C. A otro volumen de la
dilución preparada en
Recuento de aerobios viables
,
equivalente a 1 g o 1 ml de producto, agregar
Medio Tioglicolato hasta obtener 100 ml. Incubar
entre 48 y 72 horas a 35 °C. Observar ambos
medios. La muestra cumple con los requisitos del
ensayo para ausencia de gérmenes revivificables en
un gramo o mililitro si no se observa desarrollo
microbiano.
Recuento de Enterobacteriaceae
Procedimiento en placa
- Proceder según se
indica para
Recuento de aerobios viables
pero
emplear Agar Cristal Violeta-Rojo-Neutro-Bilis-
Glucosa e incubar entre 48 y 72 horas. Luego de la
incubación observar las placas para ver si hubo
crecimiento. Contar el número de colonias rojas