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aproximadamente 2,3 relativo al
R
f
de Zidovudina)
con las
Soluciones de trifenilmetanol
. Ninguna
mancha correspondiente a trifenilmetanol en el
cromatograma obtenido a partir de la
Solución
muestra
debe ser más intensa que la mancha obte-
nida en el cromatograma de la
Solución I de trife-
nilmetanol
(0,5 %), ninguna mancha secundaria
(exceptuando a la de trifenilmetanol) en el croma-
tograma obtenido a partir de la
Solución muestra
debe ser mayor en tamaño e intensidad que la man-
cha principal obtenida con la
Solución estándar A
(0,5 %) y la suma de las intensidades de las man-
chas secundarias en el cromatograma obtenido a
partir de la
Solución muestra
no debe ser mayor de
3,0 %.
ENSAYO B
Si
s
tema cromatográfico, Fase móvil, Solución
madre del estándar, Preparación estándar
y
Apti-
tud del sistema
- Proceder según se indica en
Valo-
ración.
Solución muestra
- Emplear la
Preparación
muestra
obtenida según se indica en
Valoración.
Procedimiento
- Proceder según se indica en
Valoración.
Calcular el porcentaje de cada impure-
za en la porción de Zidovudina en ensayo, en rela-
ción a la suma de las respuestas de todos los picos.
No debe contener más de 1,0 % de Impureza A de
Zidovudina y no más de 2,0 % de Impureza B de
Zidovudina y la suma de todas las impurezas del
Ensayo A
y el
Ensayo B
no debe ser mayor de
3,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles
<520>
Método III.
Solvente
: dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 265 nm y una columna de
25 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro y un
guardacolumna de 1,5 cm × 3,2 mm con la misma
fase estacionaria. El caudal debe ser aproximada-
mente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil
- Agua y metanol (80:20). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Solución madre del estándar
- Disolver una
cantidad exactamente pesada de Zidovudina SR-FA
en metanol y diluir cuantitativamente y en etapas, si
fuera necesario, con metanol para obtener una solu-
ción con una concentración de aproximadamente
1,0 mg por ml.
Solución madre de Impureza A de Zidovudina
-
Disolver una cantidad exactamente pesada de Impu-
reza A de Zidovudina SR-FA en metanol y diluir
cuantitativamente y en etapas, si fuera necesario,
con metanol para obtener una solución con una
concentración de aproximadamente 0,1 mg por ml.
Solución madre de Impureza B de Zidovudina
-
Pesar exactamente alrededor de 20 mg de Impure-
za B de Zidovudina SR-FA, transferir a un matraz
aforado de 100 ml, agregar 75 ml de metanol, soni-
car durante 15 minutos, completar a volumen con
metanol y mezclar.
Preparación estándar
- Transferir 10,0 ml de
Solución madre del estándar
, 1,0 ml de
Solución
madre de Impureza A de Zidovudina
y 1,0 ml de
Solución madre de Impureza B de Zidovudina
a un
matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
metanol y mezclar.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Zidovudina, transferir a un
matraz aforado de 100 ml y disolver con metanol.
Completar a volumen con el mismo solvente y
mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
metanol y mezclar.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 0,25 para impureza B de
zidovudina, 1,0 para zidovudina, y 1,17 para impu-
reza A de zidovudina; la resolución
R
entre los
picos de zidovudina y de impureza A de zidovudina
no debe ser menor de 1,4; el factor de asimetría no
debe ser mayor de 1,5; la desviación estándar rela-
tiva para inyecciones repetidas no debe ser mayor
de 2,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la
Preparación estándar
y la
Preparación
muestra
, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C
10
H
13
N
5
O
4
en la porción de Zidovudi-
na en ensayo.