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Límite de retinol
Fase estacionaria
y
Fase móvil
- Proceder
según se indica en
Identificación.
Solución muestra
- Preparar una solución de
aproximadamente 330 UI de Vitamina A por
l en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de butil-
hidroxitolueno al 0,1 %.
Solución estándar
- Agitar 1 ml de la
Solución
muestra
con 20 ml de solución de hidróxido de
tetrabutilamonio 0,1 M en alcohol isopropílico,
durante 2 minutos y diluir a 100 ml con ciclohexa-
no. Estabilizar con una solución de butilhidroxito-
lueno al 0,1 %.
Procedimiento
- Aplicar por separado sobre la
placa 3 µl de
Solución muestra
y 3 µl de
Solución
estándar
. Dejar secal las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: a excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la
Solución
muestra
, ninguna mancha debe ser más intensa que
la mancha principal obtenida con la
Solución están-
dar
(1 %). [NOTA: en el cromatograma obtenido a
partir de la
Solución estándar
se debe observar sólo
trazas o no se debe observar ninguna mancha co-
rrespondiente al éster de retinol.]
Sustancias relacionadas
Determinar el máximo de absorción de la solu-
ción empleada en el ensayo
Actividad
(ver
470.
Espectrofotometría ultravioleta y visible
). La solu-
ción debe presentar un máximo de absorción entre
325 y 327 nm. Medir las absorbancias
A
a 300,
350 y 370 nm y calcular la relación A /A
326
para
cada longitud de onda: ninguna de las relaciones
A /A
326
debe ser mayor de:
0,593 a 300 nm.
0,537 a 350 nm,
0,142 a 370 nm.
ACTIVIDAD
Examinar por espectrofotometría de absorción
ultravioleta (ver
470. Espectrofotometría ultraviole-
ta y visible
). Pesar exactamente entre 25 y 100 mg
de Vitamina A, disolver en 5 ml de pentano y diluir
con alcohol isopropílico hasta una concentración de
10 a 15 UI por ml. Determinar la absorbancia a la
longitud de onda de máxima absorción, aproxima-
damente 326 nm. Calcular la actividad de la Vita-
mina A en Unidades Internacionales por g por la
fórmula siguiente:
en la cual
A
326
es la absorbancia a 326 nm,
P
es el
peso de Vitamina A en g,
V
es el volumen total al
que ha sido diluida la Vitamina A para dar una
concentración de 10 a 15 UI por ml y 1.900 es el
factor de conversión de la absorbancia específica de
los ésteres de retinol en Unidades Internacionales
por g.
ROTULADO
En el rótulo se debe indicar el número de Uni-
dades Internacionales por g y el nombre del éster o
ésteres.
P
VA
100
900 .1
326