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Solución estándar A
- Pesar alrededor de 60 mg
de Riboflavina SR-FA, transferir a un matraz afora-
do de 250 ml, disolver cuidadosamente en 1 ml de
ácido clorhídrico, completar a volumen con agua y
mezclar. Transferir 4 ml a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con
Fase móvil
y
mezclar.
Solución estándar B
- Pesar alrededor de
100 mg de 5'-Fosfato Sódico de Riboflavina SR-
FA, transferir a un matraz aforado de 100 ml, disol-
ver en 50 ml de agua, completar a volumen con
Fase móvil y mezclar. Transferir 8 ml a un matraz
aforado de 50 ml, completar a volumen con
Fase
móvil
y mezclar.
Solución muestra
- Pesar exactamente alrededor
de 100 mg de 5'-Fosfato Sódico de Riboflavina,
tansferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver en
50 ml de agua, completar a volumen con
Fase móvil
y mezclar. Transferir 8 ml de esta solución a un
matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Fase móvil
y mezclar.
Aptitud del sistema
- Cromatografiar la
Solu-
ción estándar B
y registrar las respuestas de los
picos. Continuar la cromatografía durante dos
veces el tiempo de retención de 5´-monofosfato de
riboflavina. Los tiempos de retención relativos de
los restantes componentes a 5´-monofosfato de
riboflavina deben ser aproximadamente:
Sustancia relacionada
Tiempo de
retención relativo
3'4'-Difosfato de riboflavina
0,2
3'5'-Difosfato de riboflavina
0,3
4'5'-Difosfato de riboflavina
0,5
3'-Monofosfato de riboflavina
0,7
4'-Monofosfato de riboflavina
0,9
5'-Monofosfato de riboflavina
1,0
Riboflavina
1,6
La resolución
R
entre los picos de 4'-
monofosfato de riboflavina y de 5'-monofosfato de
riboflavina no debe ser menor de 1,5; y la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 1,5 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
100 µl) de la
Solución estándar A
, la
Solución
muestra
y la
Solución estándar B
. El tiempo de
retención de 5´-monofosfato de riboflavina es
aproximadamente de 20 minutos. Calcular el por-
centaje de riboflavina libre y de riboflavina en for-
ma de difosfatos de riboflavina, a partir de las res-
puestas de los picos en los cromatogramas obteni-
dos con la
Solución muestra
y la cantidad de ribo-
flavina en la
Solución estándar A
. El contenido de
riboflavina libre no debe ser mayor de 6,0 % y el
contenido de riboflavina en forma de difosfatos de
riboflavina no debe ser mayor de 6,0 %, ambos
calculados con respecto a la sustancia seca.
Límite de lumiflavina
Agitar 20 ml de cloroformo con 20 ml de agua
durante 3 minutos, extraer la capa clorofórmica y
lavar dos veces más con porciones de 20 ml de
agua. Finalmente filtrar el cloroformo a través de
un papel de filtro seco, agitarlo durante 5 minutos
con 5 g de sulfato de sodio anhidro pulverizado,
dejar reposar la mezcla durante 2 horas y decantar o
filtrar el cloroformo transparente. [NOTA: preparar
el cloroformo libre de alcohol inmediatamente antes
de usar.]
Procedimiento
- Agitar 35 mg de 5'-Fosfato
Sódico de Riboflavina con 10 ml del cloroformo
libre de alcohol durante 5 minutos y filtrar: la ab-
sorbancia del filtrado obtenido, determinada en
celdas de 1 cm a una longitud de onda de 440 nm,
con un espectrofotómetro apropiado, empleando
cloroformo libre de alcohol como blanco, no debe
ser mayor de 0,025.
Pérdida por secado
<680>
Secar al vacío sobre pentóxido de fósforo a
100 °C durante 5 horas: no debe perder más de
7,5 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles
<520>
Método II
.
VALORACIÓN
[NOTA: realizar este ensayo de manera que to-
das las soluciones estén protegidas de la luz actíni-
ca, empleando preferentemente material de vidrio
inactínico].
Preparación estándar
- Pesar exactamente al-
rededor de 35 mg de Riboflavina SR-FA, transferir
a un erlenmeyer de 250 ml, agregar 20 ml de piridi-
na y 75 ml de agua y disolver agitando. Transferir
la solución a un matraz aforado de 1.000 ml, diluir a
volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 ml de
esta solución a un segundo matraz aforado de 1.000
ml, agregar ácido sulfúrico 0,1 N suficiente
(aproximadamente 4 ml) hasta alcanzar un pH entre
5,9 y 6,1; completar a volumen con agua y mezclar
para obtener una solución de 0,35 µg de riboflavina
por ml.
Preparación muestra
- Pesar exactamente alre-
dedor de 50 mg de 5'-Fosfato Sódico de Riboflavi-
na, transferir a un erlenmeyer de 250 ml, agregar 20
ml de piridina y 75 ml de agua y disolver con agita-
ción. Transferir la solución a un matraz aforado de
1.000 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Transferir 10,0 ml de esta solución a un segundo
matraz aforado de 1.000 ml, agregar ácido sulfúrico
0,1 N suficiente (aproximadamente 4 ml) hasta