Versión de HTML Básico
POLIMIXINA B,
SULFATO DE
L
-
DAB
L
-Thr
L
-DAB
L
-DAB
L
-DAB
D
-Phe X
L
-DAB
L
-DAB
L
-Thr
L
-DAB
R
R'
H
O
*
, x H
2
SO
4
DAB = Ácido 2,4-diaminobutírico
Polimixina R R’
X
FM PM
B
1
CH
3
CH
3
L-Leu C
56
H
98
N
16
O
13
1.204
B
2
H CH
3
L-Leu C
55
H
96
N
16
O
13
1.190
B
3
CH
3
H L-Leu C
55
H
96
N
16
O
13
1.190
B
1-I
CH
3
CH
3
L-Ile C
56
H
98
N
16
O
13
1.204
Definición
- Sulfato de Polimixina B es una
mezcla de sulfatos de polipéptidos producidos por
el crecimiento de cepas de
Bacillus polymyxa
cuyo
principal componente es Polimixina B
1
. Debe tener
una potencia equivalente a no menos de 6.500 Uni-
dades de Polimixina B por mg, calculada con res-
pecto a la sustancia seca. Polimixina B debe cum-
plir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales -
Polvo blanco o casi
blanco, higroscópico. Soluble en agua; poco solu-
ble en alcohol.
Sustancia de referencia
- Sulfato de Polimixi-
na B SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A
- Examinar los cromatogramas obtenidos en
Sustancias relacionadas
. Los tiempos de retención
de los picos correspondientes a Polimixina B
1
, B
2
,
B
3
y B
1-I
en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra
se deben corresponder, respecti-
vamente, con los obtenidos en la
Solución estándar
.
B
- Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
Fase estacionaria
- Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver
100. Cromato-
grafía
) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil -
Fenol y agua (75:25).
Solución estándar A
- Disolver 20 mg de leuci-
na en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Solución estándar B
- Disolver 20 mg de treo-
nina en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Solución estándar C
- Disolver 20 mg de fenila-
lanina en agua y diluir a 10 ml con el mismo sol-
vente.
Solución estándar D
- Disolver 20 mg de serina
en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Solución muestra -
Disolver 5 mg de Sulfato de
Polimixina B en 1 ml de una mezcla de volúmenes
iguales de ácido clorhídrico y agua, calentar a
135 °C en un tubo sellado durante 5 horas y evapo-
rar hasta sequedad en un baño de agua. Disolver el
residuo en 0,5 ml de agua.
Revelador
- Disolver 1,0 g de ninhidrina en
50 ml de alcohol y agregar 10 ml de ácido acético
glacial.
Procedimiento
- [NOTA: realizar las siguientes
operaciones protegidas de la luz]. Aplicar por sepa-
rado sobre la placa, en bandas de 10 mm, 5
l de las
Soluciones estándar A, B, C
y
D
y 5 µl de la
Solu-
ción muestra
. Dejar que la placa se impregne con
los vapores de la
Fase móvil,
pero sin estar en con-
tacto con esta, durante al menos 12 horas. Desarro-
llar los cromatogramas hasta que el frente del sol-
vente haya recorrido aproximadamente tres cuartas
partes de la longitud de la placa. Retirar la placa de
la cámara, marcar el frente del solvente y secar
entre 100 y 105 °C. Pulverizar sobre la placa con
Revelador
y calentar entre 100 y 105 ºC durante
5 minutos: el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra
debe presentar bandas cuyos
valores de
R
f
se deben corresponder con los obteni-
das con las
Soluciones estándar A, B
y
C
, pero no
debe presentar una banda que se corresponda con la
obtenida con la
Solución estándar D.
En el croma-
tograma obtenido a partir de la
Solución muestra
se
debe observar una banda con un valor de
R
f
muy
bajo, correspondiente al ácido 2,4-diaminobutírico.
C
- Debe cumplir con los ensayos para
Sulfa-
tos
<410>.
Determinación del pH
<250>
Entre 5,0 y 7,0; determinado sobre una solución
preparada disolviendo 200 mg de Sulfato de Poli-
mixina B en 10 ml de agua libre de dióxido de car-
bono.
Determinación de la rotación óptica
<170>
Rotación específica:
Entre - 78° y - 90°, con
respecto a la sustancia seca.
Solución muestra
: disolver 500 mg de Sulfato
de Polimixina B en 25 ml de agua.
Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 215 nm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano desactivado para bases y total-