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gar, mientras se agita, una solución de 500 mg de
almidón soluble en 35 ml de agua. Calentar a ebu-
llición durante 2 minutos y dejar enfriar. [NOTA:
preparar esta solución en el momento de su uso.]
Procedimiento
- Aplicar por separado sobre la
placa 10 µl de
Solución estándar
y 10 µl de
Solu-
ción muestra
. Dejar secar las aplicaciones y des-
arrollar los cromatogramas hasta que el frente del
solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tas partes de la longitud de la placa. Secar la placa
bajo una corriente de aire hasta evaporación com-
pleta del ácido acético. Pulverizar sobre la placa
con
Revelador
. Exponer la placa a luz ultravioleta
de 254 nm durante 15 minutos y examinar con luz
diurna. Ninguna mancha correspondiente al ión
nitrato en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra
debe ser más intensa que la man-
cha obtenida con la
Solución estándar
(0,5 %, cal-
culado como nitrato de potasio).
Dinitrato de isosorbida y 2-Nitrato de isosor-
bida
Preparación muestra A
,
Preparación estándar
B, Preparación estándar C
,
Preparación estándar
D
y
Fase móvil -
Proceder según se indica en
Valo-
ración.
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado entre 210 y 215 nm y una
columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria
constituida por aminopropilmetilsilano química-
mente unido a partículas de sílice de 10 µm de
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente 1
ml por minuto.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Preparación estándar B
y regis-
trar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento
: ajustar la sensibilidad del equipo
de manera que el pico principal del cromatograma
obtenido a partir de la
Preparación estándar B
no
sea menor al 20 % de la escala completa del regis-
trador. Cromatografiar la
Preparación estándar D
y registrar las respuestas de los picos según se indi-
ca en
Procedimiento:
los tiempos de retención de-
ben ser: aproximadamente 5 minutos para dinitrato
de isosorbida, 8 minutos para 2-nitrato de isosorbi-
da, 11 minutos para 5-nitrato de isosorbida. El
ensayo solo es válido si en el cromatograma obteni-
do a partir de la
Preparación estándar D,
la resolu-
ción
R
entre los picos correspondientes al 2-nitrato
de isosorbida y al 5-nitrato de isosorbida es mayor
a 4,0.
Procedimiento -
Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10
l) de
Preparación muestra A
,
Preparación
estándar B
y
Preparación estándar C
. En el cro-
matograma obtenido a partir de la
Preparación
muestra A
, la respuesta del pico correspondiente al
2-nitrato de isosorbida no debe ser mayor a la del
pico principal obtenido en el cromatograma de la
Preparación estándar B
(0,5 %), y la respuesta del
pico correspondiente al dinitrato de isosorbida no
debe ser mayor a la del pico principal del cromato-
grama obtenido a partir de la
Preparación estándar
C
(0,5 %).
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por aminopropilmetilsilano químicamente unida a
partículas de sílice de 10 µm de diámetro. El cau-
dal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
Fase móvil
- 2,2,4-Trimetilpentano y alcohol
(85:15). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Croma-
tografía
).
Preparación estándar A
- Transferir 25,0 mg de
Mononitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz
aforado de 25 ml, suspender en 20 ml de
Fase
móvil,
sonicar durante 15 minutos, y completar a
volumen con
Fase móvil
. Filtrar la suspensión a
través de un filtro de membrana.
Preparación estándar B -
Disolver 10,0 mg de
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en
Fase móvil
y
diluir hasta 10,0 ml con
Fase móvil
. Diluir 0,1 ml
de esta solución hasta 20,0 ml con
Fase móvil.
Preparación estándar C
- Transferir 10,0 mg de
Dinitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz aforado
de 20 ml, suspender en 15 ml de
Fase móvil,
soni-
car durante 15 minutos, y completar a volumen con
Fase móvil
. Filtrar la suspensión a través de un
filtro de membrana. Diluir 0,1 ml de esta solución a
10 ml con
Fase móvil.
Preparación estándar D
- Disolver 5 mg de
Mononitrato de Isosorbida SR-FA y 5 mg de
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en
Fase móvil
y
diluir hasta 10 ml con
Fase móvil
. Diluir 1 ml de
esta solución hasta 10 ml con
Fase móvil.
Preparación muestra A -
Transferir 25,0 mg de
Mononitrato de Isosorbida a un matraz aforado de
25 ml, suspender en 20 ml de
Fase móvil,
sonicar
durante 15 minutos, y completar a volumen con
Fase móvil
. Filtrar la suspensión a través de un
filtro de membrana.
Preparación muestra B
- Transferir 1,0 ml de la
Preparación muestra A
a un matraz aforado de
10 ml y completar a volumen con
Fase móvil
.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Inyectar 20 µl de la
Preparación estándar A
. Ajus-
tar la sensibilidad del sistema de manera que la