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Sustancias relacionadas
[NOTA: Preparar todas las soluciones al mo-
mento de su uso.]
Sistema cromatográfico
- Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 232 nm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5
m de diámetro, esféricas,
con una superficie específica de 350 m
2
por g y un
tamaño de poro de 10 nm. El caudal debe ser
aproximadamente 0,8 ml por minuto.
Solución de hidróxido de sodio
- Preparar una
solución de hidróxido de sodio al 8,5 %. Transferir
4 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Solución reguladora de pH 2,2 -
Transferir
6,7 ml de ácido fosfórico al 87 % a un matraz afo-
rado de 1 litro, agregar 50 ml de
Solución de
hidróxido de sodio
y completar a volumen con
agua.
Fase móvil
-
Solución reguladora de pH 2,2
conteniendo 9,3 mg de perclorato de sodio por ml y
acetonitrilo (70:30). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema
en
100. Cromatografía
).
Diluyente
- Agua y acetonitrilo (7:3).
Solución madre del estándar
- Disolver 25 mg
de Espiramicina SR-FA en
Diluyente
y diluir a
100 ml con
Diluyente
.
Solución estándar A
- Transferir 2,0 ml de
So-
lución madre del estándar
a un matraz aforado de
100 ml, diluir y completar a volumen con
Diluyen-
te
.
Solución estándar B
- Transferir 5,0 ml de
So-
lución madre del estándar
a un matraz aforado de
100 ml, diluir y completar a volumen con
Diluyen-
te
.
Solución estándar C
- Disolver 5 mg de Espi-
ramicina SR-FA en 25 ml de
Fase móvil
y calentar
a 60 ºC en un baño de agua durante 30 minutos.
Solución muestra
- Disolver 25 mg de Espira-
micina en
Diluyente,
transferir a un matraz aforado
de 100 ml y completar a volumen con
Diluyente
.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución estándar A
y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Pro-
cedimiento
: Cromatografiar la
Solución estándar B
y registrar las respuestas de los picos según se indi-
ca en
Procedimiento
: el ensayo solo es válido si en
el cromatograma obtenido se observa un pico signi-
ficativo con un tiempo de retención relativo a espi-
ramicina I de aproximadamente 1,1. Cromatogra-
fiar la
Solución estándar C
y registrar las respuestas
de los picos según se indica en
Procedimiento
: la
resolución
R
entre los picos de neoespiramicina I
(Impureza A: (4
R
,5
S
,6
S
,7
R
,9
R
,10
R
,11
E
, 16
R
)-6-
[[3,6-dideoxi-3-(dimetilamino)- -
D
-gluco-
piranosil]oxi]-4-hidroxi-5-metoxi-9,16-dimetil-7-
(2-oxometil)-10-[[2,3,4,6-tetradeoxi-4-(dimetilami-
no)-
D
-
eritro
-hexapiranosil]oxi]oxaciclohexadeca-
11,13-dien-ona), que eluye en primer lugar y la
espiramicina I (que eluye entre los 13 y 17 minutos)
no debe ser menor a 6,3.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la
Solución estándar A
y la
Solución
muestra
. Cromatografiar la
Solución muestra
du-
rante al menos tres veces el tiempo de retención del
pico de Espiramicina I. Registrar los cromatogra-
mas y medir las respuestas de todos los picos: a
excepción de los picos correspondientes a espirami-
cina I, II y III en el cromatograma obtenido a partir
de la
Solución muestra
, la respuesta de ningún pico
debe ser mayor que la del pico principal obtenido
con la
Solución estándar A
(2,0 %). Ignorar cual-
quier pico con una respuesta menor a 0,05 veces la
respuesta del pico principal obtenido con la
Solu-
ción estándar A.
Composición
Sistema cromatográfico, Solución de hidróxido
de sodio
,
Solución reguladora de pH 2,2, Fase
móvil, Diluyente, Solución madre del estándar
y
Solución muestra
- Proceder según se indica para
Sustancias relacionadas.
Aptitud del sistema
(ver
100. Cromatografía
) -
Cromatografiar la
Solución madre del estándar
y
registrar las respuestas de los picos según se indica
Procedimiento
: la desviación estándar relativa de
inyecciones repetidas para el pico de espiramicina I
no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento
- Inyectar por separado en el
cromatografo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la
Solución madre del estándar
y la
Solu-
ción muestra
. Cromatografiar la
Solución muestra
durante al menos tres veces el tiempo de retención
del pico de espiramicina I. Registrar los cromato-
gramas y medir las respuestas de todos los picos.
Calcular la cantidad en porcentaje de Espiramicina
I, II y III: no debe contener menos de 80,0 % de
Espiramicina I; no debe contener más de 5,0 % de
Espiramicina II y no más de 10,0 % de Espiramici-
na III. La suma del contenido de Espiramicina I, II
y III no debe ser menor de 90,0 %, calculado sobre
la sustancia seca.
Límite de metales pesados
<590>
Método VI.
Preparar la
Solución muestra
a par-
tir de 1,0 g de Espiramicina y la
Solución estándar
empleando 2 ml de
Solución estándar de plo-
mo (10 ppm).
No más de 0,002 %
.